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样本储存 | 不同生物样本对于低温储存的温度要求
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生物样本库建立中一个非常重要的问题是:生物样本对于储存温度的要求。多数科学家认为,低温有利于长期保存生物大分子的完整性。众多研究显示,长期冻存对DNA大分子的稳定性影响不大,甚至石蜡包埋组织块中的DNA也可以进行分子生物学分析。RNA分子则易被广泛存在于细胞内、皮肤、唾液、汗液及周围环境中的RNA酶所降解,目前认为,使用液氮是保存RNA活性**理想的方法,当温度降至液氮温度(-196℃)时,细胞组织中所有的生物化学、生物物理过程均处于几乎停止状态;如经高温加工处理的石蜡包埋,组织块内的RNA分子会出现严重降解。
理论上讲,组织储存温度越低越好。理想的组织储存环境是大型液氮罐,在-196℃的液氮中组织样本可储存多年,但限于空间及经费等原因,并非所有机构都有这样的设备,因此,目前国内外大型生物样本库仍以-80℃的超低温冰箱储存为主,但在这样的低温环境下生物大分子活性保持的时间会明显缩短,具体能保存多久仍无定论。
由于多数机构手术取材地点与组织标本库并不在同一楼内,组织标本的转移、运输也需要一定时间,故各单位可酌情配备一些不太昂贵的组织储存和周转设备。
活检组织在-20℃环境中至少可保存6个月,在-40℃的环境中则可保存3年;若将组织保存在高浓度甘油中,则在-10℃~0℃的条件下也可保存2年;若将组织保存在高浓度甘油中,再储存于-80℃的低温冰箱中,则可长期保存,但这些组织不适用于RNA等研究。
同时,生物样本库应配备有效的智能监控报警系统,对样本储存温度、储存设备运行状况进行实时监控,对于断电、设备故障、液氮量不足、样本库开关和闭锁状态等情况引进险情进行实时报警。
此外,生物样本库建立中提倡采用不间断电源设备,以确保样本库内样本在短时断电情况下不会受到影响。
肿瘤组织样本一般在离体后应尽快收集,并保存于-80℃以下的超低温冰箱或液氮罐内。
血液样本与其它临床检验项目应一起采集,采集后先置于4℃冰箱内保存,尽量在3~5h内离心,分离血清、血浆,**长不得超过12h,分离获得的血清、血浆则需储存于-40℃的环境中,血清或血浆分离时一般于2500r/min离心15min;血液的离心沉淀物或提取后的DNA样本可长期储存于-145℃以下。